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    ZETA LIFE如何高效率轉染RAW264.7細胞

    發(fā)布時間: 2025-04-28  點擊次數(shù): 349次

    ZETA LIFE如何高效率轉染RAW264.7細胞

    1. 細胞接種:提前 1 天將細胞接種到培養(yǎng)板,如 6 孔板,使用含 10% 胎牛血清的高糖型 DMEM 培養(yǎng)基,且培養(yǎng)基中不加雙抗,使轉染時細胞匯合度達到 60%-80% 左右。

    2. 質粒準備:使用無內毒素提取試劑盒提取質粒,將其溶解于無菌雙蒸水或超純水中,保證質粒濃度在 500 - 700ng/ul 左右。

    3. 復合物制備:將質粒 DNA 與 Zeta Life Advanced Transfection Reagent 按照 1:1 的比例直接混合,例如 12ug 質粒對應 12ul 轉染試劑,用移液器吹吸 10 - 15 次混勻,室溫靜止 10 - 15 分鐘。

    4. 轉染細胞:將復合物加入含有(血清)細胞培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板中,并輕輕混勻,放入 37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

    5. 細胞換液:轉染 24 小時后對細胞進行正常換液。

    6. 結果分析:對于質粒 DNA 轉染,在轉染 48 - 72 小時后,通過熒光檢測來評估轉染效率;在 48 - 96 小時后,檢測 mRNA 或蛋白的表達情況。如果要進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉染后 24 - 48 小時左右,加入適量的藥物進行篩選操作。


    另外,整個實驗過程中要注意使用無菌技術,防止細胞污染;細胞的狀態(tài)對轉染效率影響較大,需確保細胞處于對數(shù)生長期且健康;按照試劑說明書要求儲存和使用轉染試劑,避免反復凍融等。


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