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免疫細胞傳代后多久適合進行轉(zhuǎn)染？
發(fā)布時間： 2023-02-06 點擊次數(shù)： 1281次理想免疫細胞轉(zhuǎn)染方法應具有效率高、細胞毒性小、重復性好、安全、簡單等優(yōu)點。病毒介導的轉(zhuǎn)染技術是目前轉(zhuǎn)染效率高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但病毒轉(zhuǎn)染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點。常見實驗室細胞傳代方法有貼壁細胞用消化法傳代和懸浮生長的細胞采用離心分離后傳代。貼壁細胞消化時，因細胞對胰酶的敏感程度不同，所以消化時間差別較大。對于初學者，消化程度也很難掌握好，加入適量胰酶，輕輕搖晃3-4次（使細胞充分與胰酶接觸），隨即吸取胰酶，放于培養(yǎng)箱消化，數(shù)分鐘后取出，輕拍培養(yǎng)瓶，見細胞自瓶壁滑下即可，若沒有則繼續(xù)消化。細胞轉(zhuǎn)染是指取對數(shù)生長的細胞，接種于培養(yǎng)板，加培養(yǎng)液，培養(yǎng)過夜（細胞長至85-90%滿）；按說明書進行轉(zhuǎn)染實驗。轉(zhuǎn)染時應注意預備脂質(zhì)體/DNA混合物必須在無血清下進行。在轉(zhuǎn)染之前更換培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率，但所用培養(yǎng)基必須37℃預溫。脂質(zhì)體/DNA混合物應當逐滴加入，盡可能保持一致，從培養(yǎng)皿一邊到另一邊，邊加入邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。對于細胞轉(zhuǎn)染，一般在細胞中期轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率會相對高一些。這個時候的細胞狀態(tài)是的。對于轉(zhuǎn)染的佳時間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr，外源基因肯定是有表達的。至于72hr，應該也還是有表達的，可能表達量會很低，主要是這個時間點的細胞大部分都衰老了。建議293T收集細胞，在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。
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