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    Calcein釋放實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)方法

    發(fā)布時(shí)間： 2021-11-12　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1882次
    實(shí)驗(yàn)步驟


    1． 靶細(xì)胞的標(biāo)記　
    用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進(jìn)行標(biāo)記。
     
    2． 效-靶細(xì)胞作用　
    殺傷實(shí)驗(yàn)在圓底96孔培養(yǎng)板中進(jìn)行。按E/T比例：50/1、25/1、12.5/1、6.25/1、3.13/1、1.56/1加入梯度稀釋的效應(yīng)細(xì)胞與標(biāo)記好的靶細(xì)胞各l00μl/孔，每個(gè)比例3復(fù)孔。同時(shí)設(shè)自發(fā)釋放組3復(fù)孔，*釋放組3復(fù)孔。效-靶細(xì)胞作用96孔培養(yǎng)板在37℃ 5％ CO2培養(yǎng)箱孵育4h后，3000r/min離心5min，將上清移入新的孔中。
     
    3． 熒光檢測　
    用熒光測量儀檢測上清的熒光值(FI)，激發(fā)光為485nm，發(fā)射光為538nm。
     
    4． 結(jié)果計(jì)算
    殺傷率(％)=■×100%



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